福建漳州诏安县一牛蛙养殖场,土池浅水养殖牛蛙(如图1),平均每个池塘15~20平方米,放养密度100~120只/ 平方米。
2012年3月份开始上料以后就逐渐有发病,初期主要是内脏出现“套肠”,当时用抗生素后死亡下降,但没有根治,之后出现白内障、歪头、烂头、打转等症状。死亡时四脚伸直,身体僵硬。
2012年8月13日到场调查,在池塘中见大量歪头、烂头的牛蛙(见图2、图3),从塘中分别取出2只歪头、2只烂头以及2只无明显疾病症状的牛蛙。外观歪头的牛蛙患有白内障(见图4),解剖见牛蛙具有“套肠”症状(见图5),其中烂头的牛蛙腹腔有大量腹水(见图6)。两只正常牛蛙无明显病变。分别从所取牛蛙的脑、肝脏、心脏、肌肉以及腹水中接种,普通营养琼脂进行细菌分离培养,并取肝、脾、肾、脑、肠和眼等组织分别用95%酒精和波恩氏固定液固定进行病毒检测和组织病理切片观察。
结果:从歪头的牛蛙(NW-1)和烂头的牛蛙(NW-3)中分离出两株细菌(见图7),经过16S rDNA测序鉴定都为脑膜炎败血黄杆菌(见图8),病毒检测结果显示,所采6只牛蛙的组织(见图9),PCR检测均能扩增出与预期片段大小(蛙虹彩病毒检测引物为545bp)相符的目的片段,将目的片段纯化后测序,序列经NCBI比对,其与GenBank中蛙虹彩病毒序列同源性为99.4%,因此可判定牛蛙感染蛙虹彩病毒。组织病理切片观察显示肝脏严重水变性(见图10),肾脏肾小管肿胀(见图11),其它组织均正常。
分析:1、脑膜炎败血黄杆菌也称为脑膜脓毒性金黄杆菌,可以引起人类脑膜炎等疾病,在蛙类也有较多致病报告,张奇亚等(1999)在“旋游症”美国青蛙脑组织分离到该菌,周永灿等(2001)在白内障和歪脖子虎纹蛙的眼、血、肝、脑、腹水分离到该菌,陈耀明等(1994)在发病牛蛙的肝脏和腹水中分离到该菌,叶雪平等(1996)在歪脖子的牛蛙脑部分离到该菌。本病例从患病牛蛙脑部也分离到该菌,发病牛蛙具有典型的歪头、白内障、共济失调等典型的蛙脑膜炎的症状。
2、据A. Cunningham(2008)蛙感染虹彩病毒后主要表现两个发病症状:皮肤溃疡和全身性出血。本病例中所采6只牛蛙均能检测出蛙虹彩病毒,很多发病蛙头部皮肤局部脱落腐烂,因此蛙虹彩病毒在本病例中可能也起到了一定的致病作用。(利洋研究所 雷燕 戚瑞荣 利洋技术部 唐绍林提供 2015.01.29)